logo

Analize> Mikroskopska (bakterioskopska) studija Gram-obojenog premaza u dijagnostici infektivnih i upalnih procesa

Informacije se objavljuju na web mjestu samo kao referencu. Obavezno se posavjetujte sa specijalistom.
Ako u tekstu pronađete pogrešku, netočne povratne informacije ili netočne informacije u opisu, obavijestite administratora web mjesta o tome.

Recenzije objavljene na ovim stranicama su osobna mišljenja osoba koja ih je napisala. Nemojte sami lijekirati!

Prosijati se na floru žena: što ga određuje, stopu i patologiju

Smear na floru - često imenovan od strane analitičara ginekologa. Što on pokazuje i koje zablude postoje na njegovom računu?

Ova se analiza može nazvati "općenito". To je primarna dijagnoza, koja dopušta liječniku da potvrdi ili poriče prisutnost upalnog procesa u vagini, uretru, cervikalnom kanalu, te također izvlači određene zaključke o mogućim menopauzama ili klimakterijskim promjenama u pacijenta.

  • mikroskopski (bakterioskopski) Gram-obojeni sloj je službeni naziv;
  • razmaz iz genitalija;
  • bacterioscopy;
  • Mikroskopija.

Koristi se za dijagnosticiranje infektivnih i upalnih procesa. Bakterijska analiza omogućuje otkrivanje bakterija u ženskim genitalijama: najjednostavniji mikroorganizmi - gonokoki, izazivanje gonoreje, trichomonas - uzročnik trichomoniasis. Također, stručnjak u mikroskopu će vidjeti neke bakterije, gljive (Candida), ključne stanice (znak bakterijske vaginoze). Vrsta mikroorganizma određena je njegovim oblikom, veličinom, i također je li obojen bojom ili ne, tj. Gram-pozitivna ili gram-negativna.

Osim toga, u pokusu iz svake točke (iz vagine, uretre, cervikalnog kanala) izračunava se broj leukocita u vidnom polju. Što više njih - što je naglašeni upalni proces. Procjena količine epitela i sluzi. Stan epitel posebno je izražen u žena reproduktivne dobi tijekom razdoblja ovulacije - usred menstruacijskog ciklusa.

  • vaginalna kandidijaza (drozd);
  • bakterijska vaginoza (nekad zvane gardnerelloza);
  • gonoreja;
  • Trihomonijaza.

Ako nema jasnih znakova jedne od ovih bolesti, ali je mrlja loša, provodi se temeljita studija materijala - izvodi se prašina.

Razlozi za obavljanje sjetve u ginekologiji

  1. Ako postoji umjereni ili veliki broj leukocita u razmazu, ali uzročnik infekcije nije poznat. Od mikroskopije, postoji niža granica detekcije mikroorganizama: 10 do 4 - 10 do 5 stupnjeva.
  2. Ako se detektira mikrob, utvrditi njegovu osjetljivost na antibiotike.
  3. Ako postoje znakovi gljivične infekcije. Točno određivanje vrste gljiva i propisivanje djelotvornog antimikotika.

Ostale vrste gljiva Candida se ne može liječiti ako nema patoloških simptoma.

Ako se pronađu ključne stanice (znakovi bakterijske vaginoze), osim toga postoje i drugi mikrobi. Za identifikaciju.

Koje su razlike između prašine, razmazivanja flore i stupnja čistoće vagine?

U metodi istraživanja. S općim razmazom, materijal nanesen na komad stakla obojen je posebnim bojama i pregledan pod mikroskopom. A kada se izvrši bakteriološka (bakterija, kultura, mikrobiološka) istraživanja, prvo se "sijali" na hranjivom mediju. A onda, nakon nekoliko dana, gledaju pod mikroskop - koje su mikroorganizmi postali kolonije.

To jest, ako govorimo o ekspresnoj analizi, dobit ćete mišljenje samo o broju leukocita, epitelu i sluzi. Sjetva nije hitna

Uz mikroskopiju, možete brzo odrediti stupanj čistoće iz vagine. Ovdje liječnik samo procjenjuje odnos normalne, uvjetno patogene i patogene mikroflore.

Klasična procjena čistoće vagine.

Što liječnici ne vide s mikroskopom

  1. Trudnoća. Da bi se to odredilo, ne treba se razmazati i bez obzira na rezultat koji će se pokazati. Morate proći krvni test za hCG, podvrći ginekološki pregled liječnika ili ultrazvuk maternice. Možete identificirati korionski gonadotropin u mokraći, ali ne u ispuštanju iz genitalija!
  2. Rak maternice i cerviksa. Za dijagnosticiranje maligne degeneracije endometrija potrebno je histološki materijal, te u velikim količinama. I uzmi ga izravno iz maternice s odvojenom dijagnostičkom curettageom.

Rak cerviksa i druge patologije (erozija, leukoplakia, koilocitoza, oštećenja HPV-a, atipične stanice itd.) Temelje se na rezultatima citološke studije. Ova analiza se uzima izravno iz cerviksa, iz zone transformacije, prema određenoj metodi s Papanicolaou bojenjem (stoga naziv analize - PAP test). Također se naziva oncocitologija.

  • Ne pokazuje takve zaraze (zppp) kao:
    • herpesa;
    • klamidija (klamidija);
    • mikoplazme (mikoplazmoza);
    • ureaplazma (ureaplazmoza);
    • HIV-a.
  • Prve četiri infekcije dijagnosticirane su pomoću PCR. Nemoguće je odrediti prisutnost virusa imunodeficijencije premazom s velikom točnošću. Morate proći test krvi.

    Kako se pripremiti za analizu i kada je to potrebno

    Liječnik uzima specijalnu četku ili Volkmannovu sterilnu žlicu pacijenta na ginekološku stolicu (bez obzira na to je li trudna ili ne). To uopće ne ozlijedi i vrlo brzo.

    Tehnički je moguće postići dobar, pa čak i savršen razmaz ukoliko sanitizirate vaginu s klorheksidinom ili miramistinom, na primjer. Ali što je to?

    • tuš;
    • imati seks;
    • koristiti nikakve proizvode za vaginalnu higijenu, intimne dezodorante i lijekove ako ih nije propisao liječnik;
    • napraviti ultrazvuk pomoću vaginalne sonde;
    • podvrgavaju se kolposkopiji.
    • prije nego što posjetite ginekologa ili laboratoriju, 3 sata, ne biste trebali urinirati.

    Doniranje udaraca treba menstrualno krvarenje. Čak i ako je posljednji dan menstruacije samo "bubuljica", bolje je odgoditi studiju, jer će rezultat vjerojatno biti loš - bit će otkriven veliki broj leukocita.

    Što se tiče unosa alkohola nije zabranjeno.

    Mogu li uzeti test tijekom uzimanja antibiotika ili odmah nakon tretmana? To je nepoželjno to učiniti u roku od 10 dana nakon primjene lokalnih djelovanja lijekova (vaginalni) i mjesec dana nakon uzimanja antibakterijskih sredstava oralno.

    Propisan mikroskopski pregled:

    • rutinski prilikom posjete ginekologu;
    • nakon prijema u ginekološku bolnicu;
    • prije IVF;
    • tijekom trudnoće (pogotovo ako je mrlja često loša);
    • ako postoje pritužbe: neuobičajeni iscjedak, svrbež, bol u zdjelici, itd.

    Tumačenje rezultata: što uzeti u obzir normu, i što - patologija u mikroflori

    Za početak, privlačimo vašu pozornost tablicu u kojoj se prikazuju indikatori takozvanog prvog stupnja čistoće. U njemu se ne spominje uretre (iako se materijal također odvaja od tamo), budući da govorimo o ginekološkim bolestima. Upalni proces u uretru tretira se urolom.

    Epitel - broj epitelnih stanica se ne broji jer nema dijagnostičku vrijednost. Ali premalo epitela govori o atrofičnom tipu mrlja - događa se kod žena tijekom menopauze.

    Leukociti - smatraju se "vidnim poljem":

    • ne više od 10 - mali iznos;
    • 10-15 - umjerena količina;
    • 30-50 - veliki broj žena primjećuje patološke simptome, a liječnik tijekom pregleda dijagnosticira upalni proces u vagini i (ili) na vratu cerviksa.

    Oblik sluzi (sluz mucusa) - normalno bi trebao biti prisutan, ali veliki broj to se događa s upalom. U sluznici mucusa ne smije biti.

    Bakterijska flora ili gr lactomorphotyp - norma, to je zaštita vagine od klice.

    Trichomonas, gonokoki i ključne stanice u zdravih žena u cerviksu i vagini ne smiju biti. Candida je također odsutna. Barem u značajnoj količini, koja se otkriva u analizi flore.

    Pokvarljivost nije velika. Ali, ako žena uđe u bolnicu, onda se od nje uzme svježe tamo, za vrijeme početnog ispitivanja u stolici.

    Obično su rezultati važeći 7-14 dana. Stoga, ako je morate prijeći operaciju, učinite to 3 dana prije ulaska u bolnicu. Posljednji od dodijeljenih testova.

    Što se nalazi u bacposseveu

    Ginekolozi će moći dešifrirati rezultat kulturnog istraživanja najbolje od svega. Ali vi sami, ako pročitate dolje navedene informacije, pokušajte shvatiti svoju analizu.

    Broj mikroorganizama može se izraziti "križevima":

    • "+" Je mala količina;
    • "++" je umjeren iznos;
    • "+++" je velik broj;
    • "++++" - bogata flora.

    No češće se broj predstavnika mikroflore iskazuje u stupnjevima. Na primjer: Klebsiella: 10 do 4 stupnja. Usput, ovo je jedan od predstavnika enterobakterija. Gram negativna štapić, aerobni mikroorganizam. Jedan od najopasnijih patogena, iako je samo oportunistički. To je zato što je Klebsiella otporna (otporna) na većinu antibakterijskih sredstava.

    U nastavku opisujemo druge uobičajene pojmove koji se nalaze u rezultatima studije, ili možete čuti od liječnika.

    Soor - je candida ili na drugi način - melem. Liječi se s antimikotikim (antifungalnim) lijekovima.

    Blastosporne gljive slične kvasacima i pseudomicelium - kandidijaza ili druga gljivična bolest, koja se obično tretira na sličan način.

    Difteroidi - uvjetno patogeni mikroorganizmi, prema rezultatima istraživanja znanstvenika, u većini žena oko 10% mikroflore su oni, kao i streptokoki, stafilokoki, E. coli, gardnerella. Ako je flora poremećena, njihov se broj povećava.

    Leptotrix je anaerobna gram-negativna bakterija koja uzrokuje leptotrikozu. Više o tome pročitajte u ovom članku.

    Mješovita flora je varijanta norme, ako nema simptoma bolesti, potpuno leukociti ili njihov snažan porast (40-60-100). 15-20 je varijanta norme, osobito tijekom trudnoće.

    Enterokoki (Enterococcus) su predstavnici intestinalne mikroflore, koji ponekad ulaze u vaginu. Gram pozitivne kokice. O enterococcus fecalis (Enterococcus faecalis), napisali smo ranije. Tu je i enterococcus coli - E. coli. Obično uzrokuju neugodne simptome pri koncentraciji iznad 10 u 4 stupnja.

    Pseudomonas aeruginosa je gram-negativna bakterija. Često pogađa osobe s niskim imunitetom. Ima dobru otpornost na antibiotike, što komplicira proces liječenja.

    Polimorfni bacil je zajednički predstavnik vaginalne biocenoze. Ako je broj leukocita normalan i nema pritužbi, njezina prisutnost ne smije biti uznemirujuća.

    Eritrociti - mogu biti u malim količinama u razmazu, osobito ako su uzimani tijekom upalnog procesa ili kada je bilo malo zapažanja.

    Coccus ili coccobacterial flora - obično tijekom infekcijskog procesa u vagini ili na cerviksu. Ako žena ima pritužbe, potreban je antibakterijski tretman - vaginalno debridiranje.

    Diplococci su vrsta bakterija (cocci). U maloj količini nemojte nanijeti štetu. Uz iznimku gonokokova - patogena gonoreje. Ona je uvijek tretirana.

    Zaključno ćemo citirati česte kratice koje su napisane na praznini rezultata analize:

    • L-leukociti;
    • Ep - epitel;
    • Pl. EP. - skvamozni epitel;
    • Gn (gn) -monokok, uzročnik gonoreje;
    • Trich - trichomonas, uzročnik trichomoniasis.

    Gramskim mrljama

    Biologija i medicina

    Ovisno o strukturi stanične stijenke, prokarioti pripadaju eubakterijama podijeljeni u dvije velike skupine. Utvrđeno je da ako su fiksne eubakterijske stanice najprije tretirane kristalnim ljubičastim i zatim jodom, formiran je kompleks u boji. S naknadnim liječenjem alkoholom, ovisno o strukturi stanične stijenke, sudbina kompleksa je drugačija: u takozvanim gram-pozitivnim vrstama, ovaj kompleks zadržava stanica, a drugi ostaje obojan, u gram-negativnim vrstama, naprotiv, obojeni kompleks ispire se iz stanica i postaje obezbojen. (Ova metoda prvi je put predložio 1884. danski znanstvenik H. Gram (Ch. Gram), koji je bio uključen u bojenje tkiva, a kasnije je korišten za bakterije).

    U nekim eubakterijama, pozitivna reakcija kada se oboji na gore opisani način, karakteristična je samo na stanice koje su u stadiju aktivnog rasta. Utvrđeno je da se naslikani kompleks formira na protoplastu, no njegovo zadržavanje na stanici ili izlučivanje iz njega tijekom naknadne obrade s alkoholom određeno je strukturnim značajkama stanične stijenke.

    Bojanje lijekova povećava osjetljivost mikroskopije, budući da se neobrađene bakterije slabo razlikuju čak i sa povećanjem od 400-1000.

    Najčešća je boja Gram-diferencijal, iako se koristi i crno-bojenje. Gram-mrlja omogućuju razlikovanje bakterija čiji se debeli stanični zid sastoji gotovo isključivo od peptidoglikana (gram-pozitivnih) iz bakterija čija stanična stijenka, osim tankog sloja peptidoglikana, ima vanjsku membranu koja se sastoji od lipoproteina i lipopolisaharida (gram negativnih). Glavna boja (na primjer, kristalna ljubičica) čvrsto je fiksirana u zidu gram-pozitivnih bakterija, dajući im plavkasto crnu boju i lako se isprati alkoholom (ili acetonom) sa zida gram-negativnih bakterija, nakon čega se crvenom bojom s kontrastnim bojama (npr. Safranin).

    Gramsko bojenje neophodno je u istraživanju sputuma. Ako se ispljuvak pravilno prima, na polju gledanja na niskom uvećanju vide se najmanje 25 neutrofila i manje od 10 epitelnih stanica. Veći broj epitelnih stanica i raznih vrsta bakterija ukazuju na to da je ispljuvak kontaminiran sadržajem orofarinksa. Iako je često teško razlikovati normalnu mikroflora od patogenih bakterija, Gramove mrlje od mrlja daju vrijedne informacije ako patogena bakterija ima bilo kakvu naznaku koja joj je dostupna (biološki signal). Na primjer, kod bakterijske vaginoze, epitelne stanice s gram-pozitivnim bakterijama su vidljive u vaginalnom razmaku.

    Mikroskopija izmeta testirana je gramima, korištena kao probirna studija. Kada se otkriju neutrofili, počinju bakteriološka istraživanja i određivanje toksina koje proizvodi Clostridium difficile.

    Gramska mrlja se također koriste za identifikaciju bakterija i bijelih krvnih stanica u CSF, sinovialnoj, pleuralnoj i peritonealnoj tekućini. Donja granica osjetljivosti metode je 10.000 bakterija po 1 ml.

    Da bi se povećala osjetljivost, tekućina za testiranje se centrifugira i priprema se mrlja od mrlja. Taj se postupak naziva obogaćivanjem materijala. Jednostavan je i osobito vrijedan za otkrivanje bakterija i bijelih krvnih stanica u CSF i bakterijama otpornim na kiseline u iskašljavanju.

    reference:

    Metode opće bakteriologije

    Tehnika slikanja mrlja. Za bojenje mrlja koristite otopine boje ili tintni papir, kako je predložio A.I. Plava. Jednostavnost pripreme, jednostavnost korištenja, kao i sposobnost pohranjivanja tintnog papira na neograničeno vrijeme bili su osnova za njihovu široku primjenu u različitim oblicima obojenja.

    Bojanje potiskuje slikarski papir. Na sušenu i fiksnu pripremu nanesite nekoliko kapi vode, stavljaju se u obojene papire od 2 × 2 cm. Tijekom cijelog razdoblja bojenja papir bi trebao ostati vlažan i čvrsto se prianjati na staklenu površinu. Kada se suši, papir se dodatno navlaži vodom. Trajanje bojenja mrlja određuje se metodom obojenja. Na kraju bojenja, papir se pažljivo uklanja s pincetom i ispirući se s vodom iz slavine i osušiti u zraku ili filter papiru.

    Bojenje mrlja s otopinama za boju. Boja se nanosi na suhu i fiksnu pripremu s pipetom u takvoj količini da pokriva cijelu mrlju. Kada se mrlje boje s koncentriranim otopinama boja (Zielyin karbolni fuchsin, karbolni gentian ili kristalivi), oni su obojeni kroz filtar papir koji zadržava čestice boje: traka filtar papira stavlja se na fiksnu mrlju, a otopina boje se izlije na nju.

    Za mikroskopsko ispitivanje, pripremljene mrlje, osušene i fiksirane, podvrgavaju se bojanju. Boja je jednostavna i složena. Jednostavno bojanje sastoji se od nanošenja jedne boje na udar za određeno vremensko razdoblje. Najčešće, jednostavna vodena boja koristi alkohol-voda (1:10) Pfeiffer fuchsin, Leffler metilen plavo i safranin. Eozin, kao kiselinska boja, koristi se samo za bojanje citoplazme stanica i toniranje pozadine. Kisela magenta potpuno je neprikladna za bojenje bakterija.

    Jednostavnim bojama, mikrobna tijela percipiraju boju boje upotrijebljene tako intenzivno kao stanične jezgre; istovremeno, citoplazma i cjelokupna pozadina premaza (ukoliko nije mrlja iz čiste kulture) obojani su u istoj boji, ali nešto blijedi. Fuchsin i gentian violet su intenzivnija boja; metilen plave mrlje mnogo blijede. Percepcija boje ovisi ne samo o svojstvima boja, nego io svojstvima mikroba koji se boji. Većina mikroba lako i brzo se oboji vodom ili vodenim otopinama boje alkohola.

    Za mikrobove s tvrdom bojom (na primjer, uzročnikom tuberkuloze) ili njihovim dijelovima (spore, flagella itd.) Moraju se primijeniti intenzivnija (prisilna) metoda obojenja.

    Moguće je prisiliti bojanje: a) povećanjem sposobnosti bojanja osnovnih boja, b) produljenjem vremena bojanja i c) djelovanjem kiselinama.

    Da bi se povećala snaga bojanja, boja je izložena visokoj temperaturi (grijanje) dok se para ne pojavi (čak i ključanje). Promjenom stupnja zagrijavanja moguće je postići različite stupnjeve jakosti boja.

    Produženje učinka otopine za bojanje na objekt može u određenoj mjeri pojačati stupanj bojanja.

    Mordanti su tvari koje olakšavaju prodiranje boje u stanice: fenol, tanin, octene i kromne kiseline, lužine itd. Mehanizam djelovanja mordanata je drugačiji: u nekim slučajevima, mordanti djeluju na bojilima, u drugima, o sposobnosti stanica da percipiraju boju. Mordanti djeluju na razmazu ili prije akcije boje (na primjer bojanje flagele), ili zajedno s bojom (fenol u Tsili fuchsin), ili nakon djelovanja boje (Lyugolevsky rješenje u Gram metodi).

    Kod slikanja mrlja, osim boja, također se koriste tzv. Izbjeljivači ili tvari za bojanje. Ovo potonje služi uklanjanju višak boje iz cijele mikrobne ćelije ili od njegovog dijela kada je boja previše snažna pri adsorpciji materijala ili kada ga premazuje pomoću toplote itd.

    Kao sredstva za izbjeljivanje koriste se: alkohol, 5% vodena otopina sumporne kiseline, 20-30% vodena otopina dušične kiseline, 3% otopina klorovodične kiseline u apsolutnom alkoholu itd.

    Za slikanje mrlja potrebno je imati na radnoj površini niz rješenja za bojenje u bocama (bolje od narančastog stakla) s pipetama i gumenim limenkama. Bočice trebaju biti označene odgovarajućim oznakama; Kako bi se izbjeglo brzo onečišćenje s naljepnicama boje, preporuča se da ga potopite otopljenim parafinom (pomoću četke). Bočice boje stavljene su u drveni stalak - blok (slika 2).

    Sl. 2. Boce za boje

    Za pranje boja i ispiranje, potrebna je bočica s epruvetom na stalku za destiliranu vodu i kalup (prašak za čašu) koji ima most za premazivanje. Nosač mostova sastoji se od dvije staklene cijevi ili štapića povezanih na krajevima komadićima gumenih cijevi. Širina postolja bi trebala biti manja od duljine klizača. Osim toga, za premazivanje su potrebni plamenik za alkohol (ili plin) i Cornet pincete za mikroskopske slajdove. Kada se slikate s grijanjem, stakleni klizač je zahvaćen pincetom i zadržao se neko vrijeme preko plamena. U slučaju duljeg bojenja, koriste se ćuvete ili male čaše, gdje ulijevaju boju i uranjaju u njega. Kada istodobno istiskujete nekoliko mrlja u ćeliju, kako bi se spriječilo da se staklene čaše držite zajedno, spojene su u dvije s isprepletenom stranom i ojačane gumenim prstenima izrezanim iz cijevi. Nakon bojenja, četkice su isprane vodom i temeljito sušene filtarskim papirom.

    Posljednjih godina otkrio je mogućnost očuvanja održivosti mikroba, uglavnom spora, tijekom bojenja. Stoga je neophodno dovoljno pričvršćivanje udaraca. Isprati vodu (kad je obojena) treba odnijeti u posebnu posudu, nakon čega slijedi neutralizacija, potrošeni filtar papir (nakon sušenja razmaza) ne smije se odložiti, već spaliti, a upotrijebljeni razmaz treba dezinficirati.

    Jednostavne metode slikanja mrlja

    Jednostavnim načinom slikanja, nekoliko kapi alkohola-voda ili vodene otopine boje se prelijevaju na fiksnu površinu 1-2 minute; Najčešće se koristi za tu svrhu Fuchsin (1:10) ili Leffler metilen plavo. Zatim se boju isprati destiliranom vodom i razmaz se osuši između dvije trake filter papira. Obično je fuchsin (1:10) boja 10-30 sekundi, i metilen plava - 2-10 minuta. Fuchsin intenzivnije mrlja mrlje, a kad se oboji s metilenskim plavim, dobivaju nježne, elegantnije pripreme. Kuglica nakon sušenja s filter papirom mora biti potpuno suha, inače, ako preostala vlaga dolazi u dodir s uljem cedra, nastaje emulzija i mikroskopija će rezultirati zamućenom slikom. Općenito, trajanje bojenja ovisi o vrsti i kvaliteti otopine za bojenje, stupnju osjetljivosti mikrobe na bojenje i debljini premaza.

    Bojanje Muromtsev

    Pripremite dva rješenja:

    Karbolična kiselina (kristalinična)

    Nakon što se boja otopi, obje otopine se izmiješaju i filtriraju kroz papirnati filter. Boja traje dugo. Smjese se oslikavaju kroz trake filter papira 15 do 30 sekundi.

    Popravljajući mrlje, autor preporuča proizvodnju mješavine alkohola (80 dijelova) s formalinom (20 dijelova) tijekom 3-10 minuta.

    Ovom mrljom razmaza u mikrobnim stanicama otkrivaju se inkluzije, bipolarnost, kapsule i spore. Metoda je pogodna za bojenje mrlja od organa, krvi, kultura na mediju s nativnim proteinom i na polu-tekući agar.

    Pozadina lijeka iz ovih supstrata je ružičasta; stanice tkiva i mikrobna tijela su obojene u plavkasto-plavu boju.

    Teške (diferencijalne) mrlje metode

    Komplicirane metode bojenja temelje se na karakteristikama fizikalno-kemijske strukture mikrobne stanice. Bit tih metoda leži u utjecaju na razmazivanje dviju boja, od kojih je jedna glavna (glavna) boja, a druga - dodatni (kontrast). Nakon izlaganja prvoj boji, mrlje su obezbojene i tek nakon toga podvrgnute su dodatnoj boji. Mnogi kemijski reagensi (kiseline, lužine, alkohol, aceton, itd.) Mogu se koristiti kao sredstvo za izbjeljivanje. Ispiranje premaza s običnom vodom također je čisto mehanički postupak izbjeljivanja, ali to zahtijeva dugo vremena; Osim toga, obezbojenje je nepotpuno. U odnosu na tvari za izbjeljivanje, mikroorganizmi se mogu podijeliti u skupine koje se lako i teško izbjeljuju. Nisu sve vrste mikroba jednako važne za sredstva za izbjeljivanje; neki su otporni na kiseline i alkohol, a drugi su otporni na kiseline. Konačno, neki, na primjer, spore, snažno se odupiru djelovanju svih sredstava za izbjeljivanje i pripadaju grupi otpornih na boju.

    Složene metode bojenja imaju važnu diferencijalnu dijagnostičku vrijednost za karakterizaciju mikroba koji se istražuje.

    Gram mrlja

    Prilikom prerade smjese (dijelova) iz organa i tkiva koji sadrže mikroorganizme, gentian violet, a zatim jod, priprema, obojana u crnoj boji, ima svojstvo izbjeljivanja pod djelovanjem alkohola. Istodobno, neke od bakterija sadržanih u smearu također postaju obojene, dok druge čine purpurno. Uz dodatno bojanje (osobito s Pfeifferovim Fuchsinom), bakterije obojene alkoholom obojene su crvenom (gram negativno). Drugi koji čvrsto drže ljubičastu boju (jod + gentian violet compound), koji nisu bijeljeni alkoholom, pripadaju grupi gram-pozitivnih bakterija. Razlika između gram-pozitivnih i gram-negativnih bakterija ovisi o razlici u njihovim izoelektričnim točkama, a sposobnost gram-pozitivnih bakterija da zadrže boju povezana je s prisutnošću magnezijeve soli ribonukleinske kiseline koju gram-negativne bakterije ne sadrže. Najbolje od svega, mrlja Gram dobivena je nakon što su kremenja fiksirana fizikalnom metodom (grijanje). Karakteristike stavova određenih vrsta bakterija na različite boje, a posebice na boju Gram metodom, karakteriziraju tzv. Tinktorska svojstva mikroba.

    Tehnika bojanja. Na premazu fiksiranu toplinom stavlja se mrlja filter papira, a sloj se stavlja na kuglicu fiksiranu toplinom, a na nju se ulijeva dovoljna količina kristalenske, karbolne ili anilin gentenske ljubičaste otopine ili neke druge ljubičaste trifenilmetanske boje (na primjer metilviolet) tijekom 1-2 minute. Zatim se isperi boja, ukloni se traka filter papira i, bez pranja vodom, otopinu Lugol izlije se na razmazivanje 1-2 minute. Otopina se odvaja i dekolorizira u alkoholu od 96 ° C tijekom 30-60 sekundi, ispire vodom i oboji s Pfeifferovim Fuchsinom (ili razrjeđen safraninom, neutralulom ili vesuvinom) 2-3 minute. Zatim se boju isprati vodom, a sloj se suši čistim filter papirom.

    Mikroskopska slika: ako su gramske mrlje ispravno obojene, gram-pozitivni mikrobi će biti obojani tamno ljubičastim i gram-negativne boje će biti obojene kao dodatna boja (na primjer, Pfeifferova ružičasta boja fuchsin fuchsina).

    Nemojte koristiti kontaminirani filter papir: mehanički prijenos mikroba iz jednog premaza na drugi je moguć, što može utjecati na rezultate mikroskopije. Trajanje izloženosti bojama, otopini Lugola (mordant) i alkohola ovisi o debljini premaza. Posebno je ključna točka u gramskoj boji jest obezbojenje mrlja s alkoholom. Uz kratku izloženost alkoholu dobivaju se premazani pripravci, a s produljenom ekspozicijom sve mikrobe (uključujući p-pozitivne) će se bojati. Na debelom, debelom razmaku (na primjer, iz agar kulture) vrijeme izloženosti alkoholu trebalo bi biti dulje od tankog premaza, posebno od tekućih kultura. Kada su izloženi alkoholu na neravnomjerno pripremljenom premazu u njegovim debelim dijelovima, mikrobi su ostali neodložni, a u tankim bi se obezbojeno; dobivate "uzorak" boje, što može dovesti do pogrešnih zaključaka.

    Ponekad se gram-negativne bakterije mogu promatrati u kulturi gram-pozitivnih bakterija, što je veće, starije populacije. Ovo nije ništa više od bakterijskih leševa koji su podvrgnuti intracelularnoj autolizi, zbog čega je stanica izgubila magnezijev ribonukleinate. S druge strane, u vrlo mladim kulturama (nekoliko sati rasta) obitelji enterobakterija, gigantski mlađi oblici ovih bakterija, koji su 2-3 puta veći od odraslih osoba (18-satni), vrlo su bazofilni zbog njihove prevelike citoplazme ribonukleinata. Stoga, kada se bojaju po Gramu, oni se tako intenzivno bojaju magentom da se, u lošem svjetlu, mogu uzeti kao gram-pozitivni vegetativni oblici sporiptičnih štapića.

    Za početnike, kao i u sumnjivim slučajevima, preporučuje se pripremiti kontrolne pripravke na istom staklu gdje se nalazi ispitna mrlja - jedna iz kulture mikroba, očito gram-pozitivna, a druga iz gram-negativnih.

    Kada se obezbojenje lijeka u gram-boje alkohola može izravno sipati na razmaz, neprestano trese staklo. Bolje je obaviti obezbojenje u kvasama gdje se ulijeva alkohol, a uzimajući Cornetove pincete, lijek se podiže i spušta, promatrajući boju alkohola koja teče iz stakla. Obezbojenje se smatra dovršenim kada kapi alkohola koji izlaze iz mrlja postaju jednakom bojom alkoholu u kiveti; obično traje 10-30 sekundi, ovisno o debljini moždanog udara.

    Alkohol 96 ° u kulve trebao bi se češće mijenjati (alkohol od 80 ° ne pravilno razlikuje razmaz). Provedeni alkohol obično izlijeva iz kvasaca u plamenike alkohola.

    Za početnike može se preporučiti obezbojenje mrlja s jodiziranim alkoholom. Utvrđeno je da ako se tekućina za bistrenje doda malo jodne tinkture, tada mikrobovi, koji su gramatski obojeni, ne cvjetaju u takvoj tekućini čak ni sat vremena, a gram negativni obojeni su za oko 5 sekundi. Prema Savateevu, dovoljno je dodati 2-4 ml 10% jodne tinkture na 100 ml 95 ° alkohola; rješenje može trajati dugo. Ako se koristi aceton umjesto alkohola, prije uporabe se dodaje jodna tinktura.

    Dvije minute je dovoljno za obezbojenje mrlja s jodiziranim alkoholom, nakon čega slijedi ispiranje s vodom i dodatna bojila Pfeiffer-fuchsina.

    Izmjena gram metode boje

    Kao što je gore spomenuto, Gram stain je najvažnija metoda za identifikaciju bakterija. Teoretski je moguće podijeliti bakterije u dvije skupine: gram-pozitivne i gram-negativne; u stvarnosti, postoje slučajevi kada se iste bakterije karakteriziraju kao "gram-selektabilne". Budući da je metodu prvi put razvio Christian Gram 1884. godine, objavljene su brojne modifikacije gramskih boja. Ispiranje bakterija za bojenje na staklenom klizanju dobiva se izravnom metodom iz kulture na tekućem ili krutom mediju, ali najbolje je pripremiti od fiksiranog, ispranog uzorka sa formalinom. Nekoliko dodatnih minuta provedeno na suspendiranju bakterija u 5% (v / v) formalinu, sakupljanje i pranje centrifugiranjem, isplati se jer su veličina i oblik stanica dobro očuvane, stanice su jednoliko obojene, a odsutni slučajni raspršeni precipitati iz tekućih medija kulture, U svakom slučaju, preporuča se da se kruta osuši u zraku i popravlja ga zagrijavanjem, kao i kod jednostavnog bojenja. Važno je standardizirati metodu gram mrlja. Slični rezultati daju još dvije metode bojanja - u modifikaciji Hookera i modifikaciji Burkea.

    Gram bojanje u modifikaciji Hookera.

    Otopina A za pripremu reagensa za boju:

    Kristal ljubičasta (s 90% sadržaja suhe tvari)

    Etanol 95% (v / v)

    Otopina B za pripremu reagensa za boju:

    Otopine A i B su pomiješane da bi se dobio kristalni ljubičasti reagens za bojanje. Ostavite 24 sata i prije uporabe filtrirajte kroz filter papir.

    Jod i kalij jodid se drobi u mortu i polako se doda kontinuirano mljevenje vode sve dok se jod ne otopi. Čuvajte u tamnoj tikvici.

    Otapalo za izbjeljivanje:

    Etanol 95% (v / v)

    Safranin O [2,5% (m / v) 95% (v / v) etanol]

    Zrakom osušena, bakterijska mrlja odjevena u toplinu uronjena je 1 minutu u otopini za bojenje kristalima.

    Prušak se opere u slabom, zakrivljenom mlazu vode iz slavine 2 sekunde.

    Smjesa se stavlja u jod mordant za 1 minutu.

    Ispiranje je slabo, trčanje pod kutom strujanja vodom iz slavine tijekom 2 sekunde, nakon čega se osuši s papirnatim papirom.

    Umočite razmaz 30 sekundi u 95% -tnom etanolu, tresući potonje, nakon čega se mrlja osuši blotting papirom.

    Umočite razmaz za 10 s u dodatnoj boji.

    Prušak se opere u slabom, kosom mlazu vode iz slavine, sve dok se boja u odvodu ne nestane, nakon čega se osuši s papirnatim papirom.

    Gram mrlja u Burke modifikaciji.

    Kristal ljubičasta (s 90% sadržaja suhe tvari)

    Mordant se pripremio na isti način kao i za modifikaciju Hookera.

    Otapalo za obezbojenje: (oprez, zapaljivo!)

    Safranin O (s 85% sadržaja suhe tvari)

    Ispiranje, sušeno u zraku i fiksirano zagrijavanjem, uronjeno je u otopinu A, dodano je 2-3 kapi otopine B i inkubirano 2 minute.

    Isperite mrljicu s jodom, a zatim ga pokrijte 2 minute s novim mordantom.

    Tkanina se opere u slabom, zakrivljenoj struji vode iz slavine 2 sekunde. Površina oko namaza se osuši blotting papirom, ali sam mrlja je zaštićen od isušivanja.

    Otapalo za uklanjanje boje se nanosi kapljicom u kuglicu s nagnutim stakalnim klizačem sve dok boja ne nestane iz otapala koje teče iz stakla. Nakon toga, razmaz se suši u zraku.

    Gram Metoda je ovo. Koja je metoda Gram?

    Gram Metoda je metoda bojenja mikroorganizama za istraživanja koja omogućuju diferencijaciju bakterija prema biokemijskim svojstvima stanične stijenke. 1884. predložio ga je danski liječnik G. K. Gram.

    Gramske bakterije obojene anilinskim bojama - gentian ili methyl violet, itd., Tada je boja fiksirana otopinom joda. Tijekom naknadnog pranja obojenog lijeka s alkoholom, one vrste bakterija koje se čvrsto boje nazivaju se gram-pozitivne bakterije (označene Gram (+)), za razliku od gram-negativnih bakterija (Gram (-)), koje se boje nakon pranja.

    Koristite u dijagnostici

    Gram bojanje je od velike važnosti u sistematici bakterija, kao i za mikrobiološku dijagnozu zaraznih bolesti.

    Gram-pozitivne kokice (osim predstavnika roda Neisseria) i sporiferičnih oblika bakterija, kao i kvasca, obojani su u plavkasto-crnoj (tamnoplavoj) boji.

    Mnoge nebulozne bakterije su gram-negativne, one postaju crvene, stanične jezgre postaju svijetlo crvene, a citoplazma je ružičasta ili grimizna.

    Tehnika bojanja

    Gram bojanje se odnosi na složenu metodu bojenja kada se na mrlje utječe dvije boje, od kojih je jedna glavna, a druga dodatna. Osim bojila, sredstva za izbjeljivanje koriste se za složene metode obojenja: alkohol, kiseline itd.

    Gram bojanje često koristi anilinske boje trifenilmetanske skupine: gentian, methyl violet ili kristal ljubičasta. Gram-pozitivni Gram (+) mikroorganizmi daju snažnu vezu s tim bojama i jodom. Istodobno, oni se ne boje kada su izloženi alkoholu, zbog čega, uz dodatno bojenje s Fuchsin Gram (+), mikroorganizmi ne mijenjaju izvorno prihvaćenu ljubičastu boju.

    Gram-negativni gram (-) mikroorganizmi tvore spoj s bazičnim bojama i jodom koji se lako uništava djelovanjem alkohola. Kao rezultat toga, mikrobi postaju obezbojen, a zatim obojeni magentom, dobivajući crvenu boju.

    Priprema materijala za slikanje

    Ispitni materijal se rasprostire u tankom sloju na površini dobro odmašenog klizača. Pripremljeni premaz osušen je u zraku i fiksiran nakon potpunog sušenja. Histološke sekcije pripremaju se rutinskom tehnikom, pričvršćuje komadiće tkiva u formalin i ulijevaju u parafin.

    fiksacija

    Kod pričvršćivanja, razmaz je pričvršćen na površinu klizača i stoga se mikrobne stanice ne ispiru tijekom naknadnog bojenja pripravka. Pored toga, mrtve mikrobne stanice mrlje se bolje od žive stanice.

    Postoji fizička metoda fiksacije, koja se temelji na utjecaju visoke temperature na mikrobnu stanicu, i kemijskih metoda koje uključuju uporabu kemikalija koje uzrokuju zgrušavanje citoplazmatskih proteina.

    Metoda fizikalne fiksacije

    Stakleni klizač s priređivanjem uzima se s pincetom ili prstima I i II desne strane rubovima kistom prema gore i glatkim kretanjem se provode 2-3 puta iznad gornjeg dijela plamenika plamenika. Cijeli proces fiksacije trebao bi trajati najviše 2 s.

    Pouzdanost fiksacije provjerava se sljedećim postupkom: površina bez razmazivanja klizača se nanosi na stražnju površinu lijeve ruke. Ako je mrlja ispravno fiksirana, staklo treba biti vruće, ali ne uzrokuje osjećaj opeklina (70-80 ° C).

    Kemijska metoda fiksacije

    Metilni alkohol, aceton, smjesa Nikiforova (mješavina etilnog alkohola 96% i anestetičkog etera u omjeru 1: 1), Karnava tekućina (etilni alkohol 96% - 60%, kloroform 30%, ledena octena kiselina 10%), alkohol (40% formalin 5 ml, etilni alkohol 96-95 ml). Stakleni klizač sa suhim slojem uronjen je u tikvicu s fiksativnom tvari 10-15 minuta, a zatim sušen u zraku. Također se koristi fiksiranje u paru od 40% formaldina nekoliko sekundi.

    Probijanje mrlja

    1. Na fiksnom razmaku, ulijte jednu od osnovnih boja 2-3 minute. Da bi se izbjeglo taloženje, obojeni su kroz filter papir.
    2. Ispustite boju, nježno uklonite filter papir. Ubrizgavanje se prelije otopinom Lugol ili otopinom jodida prema gramu (vodena otopina kalijevog jodida i kristalnog joda u omjeru 2: 1) 1-2 minute dok se pripravak ne pereži.
    3. Otopina se isprazni, ispiranje se ispere s etil alkoholom ili acetonom od 96 stupnjeva, izlijevanjem i isušivanjem sve dok se tekućina za razmazivanje i tekućina za ispuštanje ne izbriše (približno 20-40-60 sekundi).
    4. Pažljivo operite staklo u tekućoj ili destiliranoj vodi 1-2 minute.
    5. Da bi se identificirala gram-negativna skupina bakterija, pripravci su dodatno obojeni s fuchsinom ili safraninom (2-5 minuta).
    6. Isprati vodom i osušiti filter papirom.

    Tehnika bojanja bakterija u histološkim sekcijama Gram-Weigert

    1. Odvojivi odjeljci se podesi na vodu.
    2. Obojiti 20 minuta u 1% otopini pararosanilina ili bazičnog fuzina u 1% octenoj kiselini (otopina boje se zagrije do vrenja, ohladi i filtrira).
    3. Isprati se u 3 smjene destilirane vode.
    4. Boja se 5 minuta u 1% kristalini u destiliranoj vodi.
    5. Brzo isperite u 1% -tnoj otopini natrijevog klorida.
    6. Obradio se 30 sekundi u smjesi: 1 dio joda + 2 dijela kalijevog jodida + 100 dijelova destilirane vode.
    7. Ispiranje s filter papirom.
    8. Razlikovati, primjenjujući se na dio mješavine jednakih količina anilina i ksilena (1-2 ml); rješenja se ispuštaju dok se oblaci boje ne prestanu odmaknuti od kriške.
    9. Provedeno nakon 3 promjene ksilena.
    10. Ograničeno balsamom ili bilo kojom smolom otopljenom u ksilenu.

    Rezultat: Gram-pozitivne bakterije su plavo-crne, ljubičaste fibrine, jezgre su crvene.

    Vidi također

    • Bojanje mikroorganizama
    • Anilinske boje

    reference

    U njemačkom

    • Gram, HC (1884). "Uber die isolate Färbung der Schizomyceten u Schnitt- und Trockenpräparaten". Fortschritte der Medizin 2: 185-89.

    Na engleskom

    Mikrobiološke metode istraživanja

    Svrha je mikrobiološkog istraživanja utvrditi etiološku ulogu određenih mikroorganizama u slučaju bolesti ili kliničkog sindroma. Treba imati na umu da uzročnici upalnih procesa organa reproduktivnog sustava mogu biti kao UPM-predstavnici transientne komponente normalne mikroflore vagine i drugih biotopa i apsolutnih patogena - uzročnika STI-a. Takva veza između STI i oportunističkih infekcija (uzrokovana DMP) određuje potrebu za integriranim pristupom mikrobiološkom dijagnozu.

    Indikacija

    Mikrobiološke metode istraživanja koriste se za potvrđivanje ili isključivanje bolesti zarazne prirode.

    METODOLOGIJA

    PRAVILA ZA PRIKUPLJANJE KLINIČKOG MATERIJALA

    Ispuštanje iz uretre uzima se plastičnom sterilnom bakteriološkom petljom s volumenom od 1 μl ili tankom dacronu na aluminijskoj žici. Prije vanjskog otvaranja mokraćne cijevi treba očistiti gipsom ili vatom. U nedostatku vidljivih sekreta, liječnik može obavljati laganu masažu mokraćne cijevi. Tampon / petlja se umetne u uretre za 1-2 cm i uklanja se lagano pritiskanjem bočnih i stražnjih zidova. Za mikroskopske i imunofluorescentne studije, materijal se prenosi na stakleni klizač valjanjem tampona ili premještanjem petlje s laganim materijalom pod pritiskom. Za kulturu i PCR, materijal se stavlja u cijevi s odgovarajućim transportnim medijem.

    Vanjski genitalije, uoči vagine: razmazene sa sterilnim pamucnim (Dacron) tamponima iz patološki izmijenjenih područja; za upalu velike žlijezde predvorja izvodi se probijanje, a kada se apsces otvori, žlijezde se gnu s sterilnim vatom.

    Vagina: nakon umetanja zrcala i dizala, iscjedak se uzima s sterilnim vatom od stražnjeg ovarija ili od patološki izmijenjenih dijelova sluznice; u svrhu kulture, štapić se stavi u sterilnu epruvetu i odmah se šalje u laboratorij. Ako se taj zahtjev ne može ispuniti, uzorak se stavlja u ispitnu cijev s transportnim medijem.

    U svrhu mikroskopije, uzeti uzorak prenese se na stakleni klizač, valjkajući tampon sa svih strana stakla, nastojeći distribuirati materijal ravnomjerno, zadržavajući prirodnu interpoziciju svih komponenti biocenoze; premaz se osuši u zraku, fiksira s 96% otopinom etanola (2-3 kapi po razmazivanju do potpunog isparavanja), označenog stakla i u zatvorenom spremniku koji se šalje u laboratorij. Tijekom dijagnoze kulture trichomoniasis, uzeti ispuštanje se odmah stavlja u hranjivi medij i prenosi se u laboratorij.

    Cerviks: Nakon izlaganja cerviksa u retrovizorima, vaginalni dio maternice pažljivo se tretira sa vatom prebačen sterilnom otopinom natrijevog klorida ili vode, zatim se nježno umetne u cervikalni kanal, ukloni tampon bez dodirivanja zidova vagine, i stavite je u ispitnu epruvetu s transportnim medijem za kulturu. Za obavljanje mikroskopije metodom imunofluorescencije u različitim modifikacijama, virološkim istraživanjem ili PCR-om, materijal se uzima posebnim četkicom koja se umetne u kanal nakon uklanjanja sluznice ili uzimanja uzorka za kulturu. Nakon što se četkica za tampon umetne u cervikalni kanal, nekoliko puta se okreće za 1-2 cm kako bi se dobilo stanično struganje, ali izbjegavajući scarifikaciju i krvne elemente na tamponu. Uzmi materijal se stavlja u epruvete s odgovarajućim transportnim medijem. Za mikroskopske i imunofluorescentne studije, uzimani uzorak se odmah prenosi iz tampona na stakleni klizač.

    Uterus: materijal iz maternice za istraživanje može se dobiti samo pomoću posebnog uređaja s vanjskim premazom na usisavaču štrcaljke. Promatrajući pravila asepsis, prolazite cervikalni kanal i u maternicu otvorite vanjsku membranu šprice, a zatim usisavajte sadržaj. Zatim zatvorite vanjski omot i uklonite sondicu iz maternice.

    Dodirne maternice: materijal iz izvora infekcije može se dobiti samo uz kiruršku intervenciju (gnoj, eksudat, biopsijski materijal) ili tijekom dijagnostičke bušenja tumorskih formacija u zdjelici kroz vaginalne trezore (razmotrite mogućnost kontaminacije uzorka s vaginalnom mikroflora). U nekim slučajevima, ako mjesto infekcije u maternici dodiruje maternicu, ponavljane studije cervikalnog kanala mogu biti korisne kada su rezultati ispitivanja istog tipa. Mokraća: nakon temeljitog ispiranja vanjskih genitalnih organa, srednji dio jutarnjeg oslobođenog urina u količini od 5-10 ml skuplja se u sterilnom spremniku. S obzirom da se mikroorganizmi sadržani u urinu počinju množiti na sobnoj temperaturi, uzorak se mora dostaviti u laboratorij unutar 1-2 sata kako bi se izbjegle lažne rezultate kod kvantificiranja stupnja bakteriurije. Ako je nemoguće ispuniti ovaj zahtjev, moguće je pohraniti uzorak urina na temperaturi od 4 ° C u hladnjaku ne dulje od 12 sati.

    Krv: krvna kultura (otkrivanje bakterije) je neophodna ako sumnjate na razvoj sindroma sistemskog upale. Neprestana hipertermija, zimica, hipotermija, leukocitoza, znakovi multiorganne disfunkcije služe kao kategorične indikacije za mikrobiološko ispitivanje krvi. Uzorci krvi uzimaju se što je ranije moguće, od pojave vrućice 2-3 puta s intervalom od 30-60 minuta od perifernih vena gornjih ekstremiteta (uzimanje krvi na visini groznice ne povećava osjetljivost metode, optimalna količina uzimane krvi postaje važnija za otkrivanje etiologije bolesti). Optimalna uporaba standardnih komercijalnih bočica s pripremljenim nutrijentnim medijima za uzgoj aerobnih mikroorganizama i strogih anaeroba. Posebna pozornost na pridržavanje pravila asepsisa: koža na mjestu venipuncture tretira se 1-2% otopinom joda ili povidoniodina s kretanjem od središta do periferije najmanje 1 minutu. Nakon dezinfekcije, palpacija mjesta venipuncture je neprihvatljiva. Neposredno prije probijanja vena, koža se tretira s 70% otopinom etanola. Manipulacija se provodi u sterilnim rukavicama. Plastične kapice se uklanjaju iz boce, gumeni čepovi se obrisaju 70% otopinom etanola. Nakon uzimanja krvi iz vena, oni mijenjaju iglu i, probiju gumeni čep, dovode krv u bočicu (oko 10 ml krvi se nalazi u svakoj od dvije ampule). Kod djece mlađe od jedne godine potrebno je 0,5-1,0 ml krvi u jednoj bocici. U djece od 1 do 6 godina ukupna količina uzimane krvi iznosi 1 ml za svaku godinu života, a ovaj se volumen distribuira između dvije boce. Kod djece i odraslih osoba težine od 30 do 80 kg, između dvije bočice se distribuira 10-20 ml krvi.

    Uzimanje jednog uzorka iz periferne vene i druge iz katetera dopušteno je samo u izuzetnim slučajevima: ako je potrebno, identificirajte bakterijsku bakteriju povezanu s kateterom ili u slučaju objektivnih poteškoća povezanih s venipunkturom.

    MIKROSKOPSKA STUDIJA KLINIČKIH UZORAKA

    Važna faza mikrobioloških istraživanja u dijagnostici STI i oportunističkih infekcija. Omogućuje vam dati preliminarnu procjenu kvalitativnih i kvantitativnih sastav mikroflore u patološkom fokus, procijeniti kvalitetu snimanja materijala (što odgovara njegovom mjestu upale, kao što su prisutnost vaginalnog epitela u briseva cervikalni kanal, to predstavlja kršenje pravila odabira testu), kao i za prepoznavanje mikroorganizama koji ne rastu na običnim hranjivim medijima (gonokoki, trikomonadi, strogo anaerobne bakterije).

    Osjetljivost metode svjetlosne mikroskopije je na razini otkrivanja mikroorganizama u količini od 4-5 lg CFU / ml i više. Stoga, u nekim slučajevima, etiološki značajni mikroorganizmi mogu se detektirati mikroskopom. To se prvenstveno odnosi na strogo anaerobne bakterije, obično s niskim patogenim sposobnostima, njihova etiološka uloga se očituje na visokoj kvantitativnoj razini nakon akumulacije u izvoru infekcije. S obzirom na posebnost mnogih vrsta morfologije strogim anaerobe (bakteroidyprevotelly, fuzobakterii, Mobiluncus, veylonelly, leptotrihii) i mikroaerofila gardnerelly, njihovo otkrivanje u gram umrljan vaginalni razmazi iscjedak dokazuje svoju etiološki ulogu. Bitno je da je mikroskopija vaginalnih razmaza u dijagnozi bakterijske vaginoze i drugih vaginalnih infekcija.

    Međutim, većina proizvoljnih anaerobnih DIM-ova nema morfološku originalnost, a njihov stupanj patogenosti i osjetljivosti na antibiotike, naprotiv, iznimno je raznolik. Stoga, za ovu grupu UPM kulturno istraživanje postaje neophodno. Također dijagnoza bakterijske vaginoze, mikroskopska metoda ima prednost u odnosu na ispitu kulture za dijagnozu relativno rijetki u reproduktivnoj dobi država vaginalni microecology: citotoksičnih vaginoza, prijelazni oblik microcenosis, vaginalni epitel atrofiju (zadnja karakteristika menopauzu dobi).

    Dijagnoza vulvovaginalna kandidijaza često može provesti pod vaginalnog razmaza detekciju pražnjenja u obojenih razmazima ili prirodnim elementima gljiva pupanja stanice kvasca, fragmenti pseudomycelium s blastospores. Detekcija gljivičnih stanica u razmazima ukazuju na svoje velike količine (više od 4-5 lg cfu / ml), a najčešće je praćena jakom leukocitnom reakcijom u vaginalnom razmazu i kliničkih manifestacija upale vagine, što je dovoljno da se potvrdi klinička dijagnoza vaginalne kandidijaze.

    U laboratorijskoj dijagnozi gonoreje, prije svega, obavlja se mikroskopija razmaza iz uretre i cervikalnog kanala (ako nema indikacija za ispitivanje ostalih lokusa: ždrijelo, konjunktiva, rektum). Trebali biste pokušati paralelno za 2 udarca iz svake lokacije za bojanje plave i Gramove. Za akutnu gonoreja karakteriziran oskudnim odsutnosti ili broja predstavnika normalne mikroflore (LB), veliki broj neutrofilnih leukocita i prisutnost gram-negativnih diplococci smještene u leukocitima (fenomen nedovršena fagocitoza) i bez leukocita. Kronična gonoreja karakterizira prisutnost različitih mikroflora zajedno s gram-negativnim diplocokima unutar i izvan leukocita i velikog broja neutrofila. Najčešće se dijagnoza gonoreje može provesti na temelju mikroskopije Gramskih razmaza. Međutim, trudnice, adolescenti i djeca definitivno kulturne studije s identifikaciju vrste Neisseria gonorrhoeae razlikovati od ne-patogenom N., koji prepoznaju komponente normalnom vaginalnom mikroflore kod djevojčica, te u slučaju uzimanja materijala iz orofarinksa trebali biti svjesni velikog broja vrsta ne-patogenom Neisseria u ovim razmazima u bilo dob.

    Mikroskopska metoda je i danas glavna u dijagnozi urogenitalne trichomoniasis. Provesti studiju domaćeg lijeka i / ili obojane mrlje. Mikroskopija domaćeg lijeka, važno je zapamtiti da svježe materijal (odvojivi uretra, vagina) treba istražiti - u pripremi otkrivaju živu, mobilnu Trichomonas. Za ovaj preparat je pripravljen po metodi „slomiti” kapi (odvodnim snimljene s dodatkom toplog, blizu tjelesnu temperaturu 0,9% otopine natrijevog klorida je pokrivena s pokrovnim staklom), ili „visi” kap (suspenzija uzeti iz taloga se stavi u jažicu staklenu ploču) i mikroskopiruyut pri povećanju od 400 puta kada je kondenzator spušten. Pripreme za bojenje s metilenskim plavom, Gram ili Romanovsky - Giemsa su pripremljene iz ovog materijala. Dijagnoza se utvrđuje na temelju identifikacije tipičnih oblika Trichomonas vaginalis u smearima.

    Prilikom ocjenjivanja rezultata vaginalne mrlje mikroskopije, treba obratiti pozornost na sljedeće točke:

    • stanje vaginalnog epitela: dominiraju stanice površinskog, srednjeg ili parabazalnog sloja; prisutnost tzv stanica „osnovne” - površine epitelnih stanica, gusto prijanja na njih gramvariabelnymi male palice skriva granice stanica, ili „lozhnoklyuchevyh” stanice (Slika 6-1.) - povećana adhezija na epitelnim stanicama gram pozitivnih šipke obično laktobacila ( Slika 6-2);
    • reakcija leukocita: njegova prisutnost, težina, manifestacije fagocitoze, njegovo dovršenje;
    • sastav mikroflora: kvantitativna i kvalitativna procjena morfotipova i tinktorskih svojstava.

    Sl. 6-1. Lažne ključne stanice (gramska mrlja mikroskopija).

    Sl. 6-2. Normotenoza (mikroskopija Gram testera). Procjena ukupne mikrobne kontaminacije provodi se na sustavu s 4 točke (Nugentov kriterij, nešto izmijenjen od strane nas) - brojem mikrobnih stanica otkrivenih u istom vidnom polju tijekom mikroskopije s uranjanjem:

    + - do 10 mikrobioloških stanica na polju gledanja - minimalni broj; ++ - od 11 do 100 mikrobioloških stanica na polju gledišta - umjeren broj; +++ - od 100 do 1000 mikrobnih stanica na polju gledišta - veliki broj;

    ++++ - više od 1000 mikrobnih stanica na polju gledišta - masivnu količinu.

    Kvalitativna procjena vaginalne mikroflore uključuje diferencijaciju svih morfotipa prema njihovim tinktorskim svojstvima i morfološkim značajkama. Razlikovati morfotipove laktobacila fuzobakterii bakterijama, Mobiluncus, leptotrihy, veylonell, gardnerellas, kao i gram-pozitivni koki, koliformi drži kvasci. Trichomonas i drugi paraziti mogu se naći u smearu.

    Kada se sumnja na sifilis, tamno polje mikroskopije odstranjivih erozija i čireva i metoda izravne imunofluorescencije uz uporabu AT dijagnostičke dijagnostike T. pallidumu nisu izgubili dijagnostičku vrijednost. Ove metode se koriste u slučajevima s kliničkim manifestacijama na koži i sluznicama koje se sumnjaju na sifilis. Osim toga, pripravci za mikroskopiju mogu se pripraviti iz punktata regionalnih limfnih čvorova, cerebrospinalne tekućine, amnionske tekućine. Erozivnoyazvennuyu površina blago (tako da se ne dobivaju krvarenje) je pročišćen pomoću gaze obrisak navlaži 0,9% otopinom natrijevog klorida, a zatim je pažljivo otvaranja i zatvaranja dva prsta bazične čireva / erozije, stimulira sekreciju serozni tekućine, koje se bakteriološkog petlju ili lagano primjenu na erozivni površinski stakleni klizač. Dobiveni serozni iscjedak pomiješa se s jednakom količinom 0,9% -tne otopine natrijevog klorida, prekrivene pokrovnim staklom, a nativna priprema se mikroskopira kako bi se detektirala patogena za niz karakterističnih morfoloških znakova i tip pokreta. Potrebno je određeno iskustvo kako bi se mikroskopom razlikovala blijeda treponema od treponemommensals urogenitalnog trakta.

    Više ciljeva može biti dijagnoza mikroskopskih preparata izravnom imunofluorescencijom. U takvim slučajevima, iscjedak iz staklenog klizača iz bilo kojeg tkiva tekućine, površine patoloških područja (uključujući i obdukcijski materijal) se suši u zraku, fiksira etanolom ili metanolom. Nakon toga se na pripravak nanosi anti-treponemalni globulin specifičan za T. pallidum. Mikroskopski pregled agensa detektira svijetlo zelena specifična fluorescencija.

    Imunoluminescentna metoda - glavna i u laboratorijskoj dijagnostici HG, dok se pri prepoznavanju patoloških materijala Ag virusa detektira. Obično se koristi metoda izravne imunofluorescencije, što omogućuje odvojeno određivanje obje vrste HSV i HSV1 i HSV2 serotipa. Osjetljivost i specifičnost metode ovise o kvaliteti korištene dijagnostičke komplete. Materijal za proučavanje obično je tekućina iz otvorenih vezikula, ispuštanje erozivnih površina kože i sluznice ili struganje s zidova cervikalnog kanala (s latentnim oblikom infekcije). Materijal se uzima s bakteriološkom petljom ili posebnim brisom i prenosi se na stakleni klizač.

    Kod urogenitalne klamidije, otkrivanje Ar klamidije pomoću imunofluorescentne mikroskopije jedna je od vodećih laboratorijskih dijagnostičkih metoda. Uobičajeno se koristi izravna imunofluorescencija tijekom kojega se monoklonska antitijela primjenjuju na različite Chlamydia Ag-lipopolisaharide (skupine), glavne proteinske vrste vanjske membrane Chlamydia i antitijela na rekombinantnu Ag klamidiju. Kvaliteta dijagnostike određuje stupanj osjetljivosti metode. Od velike je važnosti u ocjenjivanju kvalitete izravne imunofluorescencije uzimanje materijala ima: mrlja na uzorku stakla uzima iz grlića maternice moraju biti prisutni cilindrične stanice epitela i odsutno pločastih epitelnih stanica, eritrocita i leukocita. Rezultat se smatra pozitivnim ako se u razmazima odvojivog mikroskopa s fluorescentnim mikroskopom na narančasto-smeđoj pozadini epitelnih stanica nalazi najmanje 5 osnovnih tijela s povećanjem od 100 puta. Zbog mogućih lažno pozitivnih rezultata ova metoda nije preporučljiva za proučavanje materijala dobivenih iz nazofaringealnog i rektuma.

    KULTURNO ISTRAŽIVANJE

    Metoda sadnje i izolacije čistih kultura patogena bolesti služi kao "zlatni standard" mikrobiološke dijagnostike. Uz mikroskopiju, kulturno istraživanje glavna je metoda dijagnosticiranja gonoreje, trichomoniasis, klamidije. Molekularne i biološke metode istraživanja još uvijek nisu dovoljno specifične za otkrivanje tih STI patogena u zamjenu klasičnih metoda, ali nesumnjivo budućnost pripada njima. Različita je situacija nastala s oportunističkim infekcijama genitalnog trakta, čiji broj u doba antibiotika i urbanizaciju života društva stalno raste, njihova etiološka struktura i osjetljivost na antibiotike dinamički se mijenjaju. Česta rezistencija na antibiotike tih mikroorganizama uzrokuje neuspjeh liječenja, stoga je odgovarajući izbor racionalne etiotropne terapije u suvremenim uvjetima prepoznat kao stalni klinički problem.

    Poznato je da uzročnici upalnih procesa genitalnih organa mogu biti različiti UPM, normalno dio prolazne komponente autohtone (normalne) mikroflore vagine i susjednih biotopa. Njihova patogena svojstva se manifestiraju samo pod određenim uvjetima, poremećaji imunološke homeostaze makroorganizma i lokalne otpornosti kolonizacije. U takvim uvjetima, mikrobiološka dijagnostika treba uzeti u obzir moguću etiološku ulogu širokog spektra patogena, a ne samo bilo kojeg specifičnog patogena, kao u dijagnozi klasičnih zaraznih bolesti uzrokovanih apsolutnim patogenima. Zadatak istraživanja nije samo identifikacija mikroorganizama koji se nalaze u patološkom materijalu, nego i obrazloženje njihove etiološke uloge u upalnom procesu u ovom pacijentu. Zbog toga, kod sjetve kliničkog materijala, posebno od lokusa, i obično s mikroflora, vrlo je važno koristiti najraznovrsnije hranjive tvari pogodne za uzgoj širokog spektra mikroorganizama. U ovom slučaju potrebno je uzeti u obzir kvantitativne omjere rasta različitih vrsta mikroorganizama u primarnom sijanju, budući da pravi uzročnik najčešće pripada prevladavajućoj ulozi među suradnicima. Međutim, postoje vrste koje pokazuju patogena svojstva u maloj količini (streptokoki skupina A i B, proteus, Klebsiella, Staphylococcus aureus, Listeria, itd.).

    Mikrobiološka dijagnoza oportunističkih infekcija vagine temelji se na integriranoj procjeni rezultata mikroskopskih i kulturnih studija. Istodobno, strogo anaerobna mikroflora komponenta se procjenjuje mikroskopijom grama - veliki broj anaerobnih morfotipa otkrivenih svjetlosnom mikroskopijom (njihov broj u odvojivoj vagini prelazi 6 mg CFU / ml) ukazuje na njihovu etiološku ulogu. Istodobno, određivanje osjetljivosti anaerobe na antibiotike trenutačno nema kliničku opravdanost, budući da je velika većina od njih vrlo osjetljiva na antibiotike s anti-anaerobnom aktivnošću (klindamicin, metronidazol).

    Naprotiv, s obzirom na fakultativne aerobne i aerobne mikroorganizme, dijagnostička vrijednost mikroskopskog pregleda vaginalnog pražnjenja značajno se smanjuje. To se prvenstveno odnosi na činjenicu da se patogene sposobnosti ovih bakterija mogu očitovati na relativno maloj količini (3-5 lg CFU / ml) koja se ne detektira mikroskopom. Drugo, čak i ako su morfotipovi fakultativnih anaerobnih bakterija pronađeni u gramima, morfološki su isti u mnogim vrstama i rodovima bakterija (to su kolibični štapovi ili gram-pozitivni cocci). Istovremeno, njihova patogena svojstva i osjetljivost na antibiotike mogu biti vrlo raznolika. Stoga, za obilježavanje fakultativnog anaerobnog dijela mikrocenoze, kao i mikroaerofila (prvenstveno laktobacila) koji morfologijom mogu biti slični mnogim vrstama obveznih anaerobnih bakterija (klostridija, eubakterija, propionibakterija, itd.), Potrebna je studija kulture - vaginalni iscjedak. U tu svrhu upotrebljava se 5% krvnog agara (najčešći medij za većinu UPM-a), Saburo agar (za izolaciju gljiva), MPC medij (za uzgoj laktobacila).

    Rezultati studije kulture pružaju priliku za procjenu sastava vrsta i kvantitativnog omjera različitih vrsta u pridruživanju mikroorganizama, uključujući gljive i laktobacile, i time potvrditi da su laktomorpotipi koji su detektirani gramatičkim mikroskopom pripadaju genom laktobacila. Odabir patoloških materijala i identifikacija različitih vrsta Enterobacteriaceae obitelji, stafilokoka, streptokoka, ne fermentirajućih bakterija, Neisseria, Corynebacteria, gljivica i drugi mikroorganizmi nakon kvantificiranja njihovog rasta, omogućuje određivanje stupnja njihovog etiološkog značaja u razvoju vaginitis u određenom pacijentu.

    Osim toga, u slučajevima kada je dijagnoza bakterijske vaginoze izvedena mikroskopom gram-negativnog razmaza, rezultati zasijavanja mogu otkriti povišene UPM titre (gljive, enterokoke, koliformne i druge bakterije) koje mogu izazvati komplikacije nakon etiotropne terapije lijekovima s anti-anaerobnom aktivnošću. Posebno treba uzeti u obzir mikroorganizme koji čak i pri niskim koncentracijama predstavljaju faktor povećanog rizika za fetus (Listeria, Streptococcus Groups A i B).

    Metode za identifikaciju nukleinskih kiselina

    Metode za otkrivanje DNA i RNA patogena trenutno se koriste uglavnom za dijagnozu virusnih infekcija. Metode genske dijagnostike temelje se na identifikaciji nukleotidnih sekvenci izravno u patološkom materijalu uz pomoć molekularnih proba - umjetno izvedenih nukleinskih kiselina komplementarnih virusnih nukleinskih kiselina i označenih biotinom ili radioaktivnom oznakom.

    Značajka PCR metode je višestruko kopiranje (amplifikacija, replikacija) korištenjem enzima DNA polimeraze specifičnog fragmenta DNA koji se sastoji od nekoliko desetaka ili stotina parova nukleotida, što je jedinstveno, odnosno specifično za ovu vrstu virusa patogena. Mehanizam replikacije je takav da završetak fragmenta može započeti samo u određenim početnim blokovima, za čije se stvaranje u određenim područjima DNA koriste primeri - posebno sintetizirani oligonukleotidi. Primeri su komplementarni sekvencijama unutar granica određenog fragmenta, a sinteza DNA nastavlja se samo unutar tih granica.

    PCR proces se sastoji od velikog broja ciklusa sinteze (amplifikacije) specifičnog fragmenta DNA, akumulacije velikog broja kopija, koje se zatim mogu otkriti uobičajenim metodama detekcije (imunofluorescentna analiza, elektroforeza).

    ● jednostavnost izvršenja ● mogućnost potpune automatizacije ● brzina dobivanja rezultata ● malu količinu patološkog materijala potrebnog za istraživanje ● mogućnost dijagnoze akutnih kroničnih latentnih infekcija;

    ● identifikacija neumoljivih, postojanih patogena.

    Osjetljivost PCR-a najprikladnija je kao dijagnostička metoda (nekoliko redova veličine veće od ostalih testova). Specifičnost metode je također visoka, ali do sada većina ispitnih sustava nije dovoljno pouzdana da se izbaci klasične metode za dijagnosticiranje čak i apsolutnih patogena.

    Što se tiče oportunističkih infekcija, značaj molekularnih genetičkih dijagnostičkih metoda još se ne može prepoznati kao značajan, jer je odlučujući čimbenik u razvoju takvih upalnih procesa kvantitativni čimbenik, a ne prisustvo samog mikroorganizma na lokusu koji se ispituje.

    Trenutno se PCR metode široko koriste u dijagnostici virusnih, parazitskih i bakterijskih STIs, često kao primarni screening, kao i kontrolu lijeka u kombinaciji s drugim metodama laboratorijske dijagnoze. Korištenje najnovije tehnologije, kao što su real-time PCR i NASBA, moguće je odrediti točnu količinu virusa kod pacijenata s HIV-om.

    SEROLOŠKE DIJAGNOSTIČKE METODE

    Metode koje identificiraju specifične patogene AT i Ar. Njihova uloga je važna osobito u slučajevima kada izolacija patogena predstavlja značajne poteškoće. Kada se detektira specifična AT, potrebno je utvrditi povećanje njihovih titara, u vezi s kojima se proučavaju upareni serumi s intervalom od 2-3 tjedna. Definicija klasa imunoglobulina jasno opisuje stadije infektivnog procesa i u nekim slučajevima može poslužiti kao prognostički znak njenog tijeka.

    Od velike važnosti su metode za otkrivanje Ag patogena. Oni se mogu otkriti već u najranijim stadijima infektivnog procesa, što omogućuje izričitu dijagnozu, a kvantitativno određivanje Ar u dinamici bolesti služi kao kriterij za učinkovitost liječenja.

    Serološke metode postale su od najveće važnosti u dijagnozi sifilisa i HIV infekcije. U dijagnozi HIV infekcije obično se koristi enzimski vezani imunosorbentni test, koji omogućuje dobivanje pozitivnih rezultata studije već od 1-1.5 mjeseci nakon infekcije. Pozitivni rezultati probira pomoću enzimskog imunološkog testa zahtijevaju potvrdu metodom imunoblota, što omogućuje verifikaciju protutijela na različite virusne proteine.

    U dijagnozi sifilisa trenutno se koristi niz seroloških metoda koje omogućuju otkrivanje protutijela na razne determinante AH T. pallidum u tijelu. Ovisno o korištenoj Ag, serološke reakcije podijeljene su u dvije skupine: treponemal i non-treponemal. Prva se koristi za screening. Tehnički su jednostavni, ne zahtijevaju puno vremena, kvantitativna verzija reakcije s određivanjem AT titra je moguća, što im omogućuje da se koriste za procjenu učinkovitosti liječenja. Međutim, ti testovi ne otkrivaju AT tijekom prvih 2-4 tjedna primarne sifilisa, a moguće su i lažno pozitivne i lažno negativne reakcije.

    Testovi treponemala imaju visoku specifičnost i omogućuju potvrđivanje rezultata ne-treponemalnih testova. Ali testovi treponemala nisu bili vjerodostojni u proučavanju cerebrospinalne tekućine (osim reakcije izravne hemaglutinacije), oni se također ne koriste kao kontrola za učinkovitost liječenja i nije isključena mogućnost lažnih pozitivnih reakcija.

    Uz oportunističke bakterijske infekcije, čiji uzročnici imaju mnogo uobičajenih argensa s argininskim Ag agregatom i koji služe kao slabi stimulatori za proizvodnju specifičnih protutijela, serološke dijagnostičke metode praktički se ne koriste.

    TUMAČENJE REZULTATA MIKROBIOLOŠKOG ISTRAŽIVANJA

    OCJENA REZULTATA MIKROBIOLOŠKOG ISTRAŽIVANJA FACILITIRANIH ŽENSKIH GENITALNIH ORGANA

    U procjeni rezultata mikrobioloških studija odvojen sakaćenje ženskih genitalija mora uzeti u obzir niz atributa u svakom slučaju: podaci mikroskopija primarni Papa-test materijalnih, rezultati izravne sjetve na čvrstim hranjivim podlogama (kvantitativna procjena rasta raznih vrsta), kao i klinički simptomi bolesti i povijest pacijenta. Tako, u istraživanju materijala zatvorenih šupljina (točkaste tumora formacijama u zdjelici, amnionske tekućine), kao što su organi, obično sterilni (maternica sadržaj struganje endometrija komada organa i tkiva uklonjene tijekom operacije), rast mikroorganizama, naročito u monokulturi, dokaz njihove etiološke uloge. U proučavanju materijala lokusa i obično imaju raznolik mikroflore, pridaju veliku važnost za procjenu sastav vrsta kvantificirati rast raznih vrsta uzgaja u osnovnoj oplata, jedinstvenost rezultira ponovljenog istraživanja i kliničkih podataka. Sljedeći mikrobiološki kriteriji za procjenu vaginalni microcenosis za pojedine nosological oblika u žena reproduktivne dobi može biti ponuđena na temelju cjelovitog vrednovanja mikroskopija i kulture studija odvojivi vagine.

    NORMOTSENOZ
    • Mikroskopski razmaz, Gram obojene (slika 6-3.): ♦ vaginalni epitel sadrži stanice površinskog sloja, srednji sloj je manje uobičajene stanice (omjer može varirati ovisno o fazama menstrualnog ciklusa, tijekom trudnoće, mnogo posrednih stanica), „ključ” stanice u kojima nedostaje ponekad naići na „lozhnoklyuchevye” stanice, reakcija ♦ leukocita je odsutan ili slabo izražene - pojedinačne leukocite u vidnom polju; ♦ ukupan broj mikroorganizama umjerene ili velike, ♦ dominantnu morphotype - laktobacila drugi mo rotipi su odsutni ili se izračunava njihov broj

    pojedinačne mikrobne stanice u rijetkim vidovima polja.

  • Kulturno istraživanje: ♦ ukupna mikrobna kontaminacija - 6-8 lg CFU / ml; ♦ apsolutna prevlast laktobacila;

    ♦ UPM u niskom titru (manje od 3 lg CFU / ml) ili odsutan.

    Sl. 6-3. "Ključne" stanice (Gram test mikroskopija).

    BAKTERIJSKA VAGINOSIJA
    • Mikroskopski razmaz obojenih Gram (Sl. 6-4): ♦ vaginalni epitel sadrži stanice površinskog sloja je rijetka intermedijarni stanice često - „ključ” stanica, leukocita ♦ reakcija je obično nema; ♦ ukupan broj mikroorganizama masivnih manje - super;

    ♦ morfotipovi strogih anaeroba i gardnerella prevladavaju, laktomorpotipi su odsutni ili nisu određeni kao pojedinačni u svim poljima gledišta.

  • Metoda kulture: ♦ ukupna mikrobna kontaminacija prelazi 9 mg CFU / ml; polimikrobna mikroflora s apsolutnom prevalencijom obveznih anaerobnih vrsta i gardnerella, ♦ upotrebom samo aerobnih uvjeta uzgoja, rast mikroorganizama je odsutan ili se promatra rast UPM, često u malom titru;

    ♦ ne postoji rast laktobacila ili je titar oštro smanjen (manje od 5 mg CFU / ml).

    Sl. 6-4. Bakterijska vaginoza (Gram test mikroskopija).

    VAGINALNA KANDIDIZA

    Ovisno o koncentraciji gljivica u ispuštanju vagine i prateće mikroflore, mogu se razlikovati tri oblika vaginalne candidiaze.

    • Razmazi mikroskopije obojene prema Gram stain (slika 6-5.): ♦ vaginalnog epitela pretežno površinske slojeve, ali može biti i mnogi međuprodukti i parabazalnih stanica (proporcionalna težini kliničkom bolesti); ♦ umjerenu leukocita reakcije (10-15 u leukocite Vidno polje) u izraženu (30-50 i više leukocita u vidnom polju); ♦ ukupnog broja mikroorganizama umjerene ili velike;

    ♦ dominiraju morfotipovi laktobacila, prisutni su stanice kvasca, fragmenti pseudomicelija s blastosporama.

  • Metoda kulture: ♦ ukupan broj mikroorganizama ne prelazi 8 mg CFU / ml; ♦ gljivice kvasca su prisutne u titru od više od 4 g CFU / ml;

    ♦ Lactobacilli se sije u titru od više od 6 mg CFU / ml.

    Sl. 6-5. Candida vaginitis (test mikroskopija, Gram-obojen).

    Kombinacija bakterijske vaginoze i vaginalnog karcinoma.

    • Mikroskopski razmaz obojenih Gram (slika 6-6.): ♦ vaginalni epitel pretežno površinski slojevi su prisutni „ključ” epitelne stanice, ♦ ili umjereno ozbiljnu reakciju leukocita; ♦ ukupan broj mikroorganizama ili velikih masivni, ♦ ekipe morfotipove stroga anaerobe i Gardnerella, stanice kvasca su prisutna i / ili fragmente pseudomycelium gljiva;

    ♦ Laktomorpotipi su odsutni ili su pojedinačni.

  • Postupak kulture: ♦ masivni ukupan broj mikroorganizama (više od lg 9 CFU / ml), ali samo kada se uzgajaju pod aerobnim uvjetima rasta oznaka kvasaca u umjerenim ili visokog titra (4-7 lg CFU / mL); rast ♦ laktobacila ili offline niski titar (manje od 4 ug CFU / ml);

    ♦ mikroorganizmi dominantni u sadnji - bakterioidi, Prevollae, Gardnerella, anaerobni kokos.

    Sl. 6-6. Kombinacija bakterijske vaginoze i vaginalnog karcinoma (Gram test mikroskopija).

    Asimptomatski prijevoz gljiva.

    • Mikroskopija mrlje od Gram-a: ♦ vaginalni epitel predominantno predstavlja stanice površinskih slojeva, ♦ reakcija leukocita nije ekspresirana, pojedini leukociti su vidljivi;

    ♦ dominiraju morfotipovi laktobacila, gljive najčešće ne otkrivaju ili se na rijetkim poljima gledaju pojedinačne stanice kvasca.

  • Metoda kulture: ♦ Ukupni broj mikroorganizama ne prelazi 8 mg CFU / ml;

    NON SPECIFICNI VAGINITIS

    Mikroskopski razmaz, Gram obojene (slika 6-7.): ♦ vaginalni epitel sadrži površinske i srednje stanica tijekom upalnih procesa parabazalnih stanica u susret ♦ izražena u različitim stupnjevima leukocita reakcije (više od 10 leukocita po vidnom polju); ♦ ukupno mikroorganizmi umjerena; ♦ laktobacili odsutan ili drastično smanjene broj (do jednom polju gledišta);

    ♦ prevladavaju morfotipi tipa UPM - koliformni štapići ili gram-pozitivni kokosi.

    Metoda kulture: ♦ nedostatak rasta laktobacila ili njihove minimalne količine;

    • rast opcionalne aerobne UPM-a, najčešće jedan tip u visokom naslovu.

    Sl. 6-7. Nespecifični vaginitis (test mikroskopije, Gram-obojen).

    INTERMEDIJALNA OPCIJA MIKROCENOSIJE
    • Mikroskopska premazati obojeni bojenje po Gramu: ♦ sadrži vaginalni epitel površinske stanice mogu zadovoljiti jednu „ključ” stanice ilinablyudat sklonost za njihovo oblikovanje, ♦ leukocita ne više od 10 vidnom polju; ♦ ukupan broj mikroorganizama umjerene ili velike;

    ♦ dominiraju morfotipovi strogih anaeroba i gardnerela u kombinaciji s umjereno smanjenim titrom laktobacila.

  • Metoda kulture: ♦ Ukupni broj mikroorganizama je 6-8 lg CFU / ml; ♦ Titar laktobacila je smanjen, ali može doseći umjerene vrijednosti (5-6 lg CFU / ml);

    ♦ umjereni titar obveznih anaeroba i gardnerella (5-7 lg CFU / ml).

    CITOLIČKA VAGINOSA
    • Mikroskopija Gram-mrlja (slika 6-8): ♦ velika većina epitelnih stanica je citoliza; elementi razaranja stanica - detritus, izložene jezgre površinskih i srednjih stanica prevladavaju u razmazivanju; ♦ leukociti su odsutni ili njihov broj ne prelazi 10 u očima;

    ♦ velike količine mikroflore, koje predstavljaju tipični morfotipi tipa lactobacillus.

  • Metoda kulture: ♦ bogat rast samo laktobacila;

    ♦ istodobna mikroflora je obično odsutna.

    Sl. 6-8. Citolitička vaginoza (Gram test mikroskopija).

    VAGINALNA EPITELIJSKA ATROFIJA
    • (Sl. 6-9), mikroskopski razmaz obojena Gram: ♦ ovisno o stupnju atrofije vaginalne sluznice epitel sadrži različite omjere broj intermedijarnih i parabazalnih stanica, s rastom atrofije povećava broj parabazalnih i bazalnih stanica, ♦ leukocita je tipično manja od 10 u očima;

    ♦ mikroflora je praktički odsutna; pojedinačni laktomorpotipi ili UPM morfotipi mogu se naći u rijetkim vidovima polja.

  • Metoda kulture: ♦ niska ukupna mikrobiološka kontaminacija (2-4 g CFU / ml);

    ♦ niske titre oba laktobacila i UPM.

    Sl. 6-9. Vaginalna epitelna atrofija (mikroskopska klica, Gram-obojena).

    OCJENA REZULTATA MIKROBIOLOŠKOG ISTRAŽIVANJA KRVI

    Prilikom izolacije tipičnih patogena (Staphylococcus aureus, Listeria, Klebsiella, ostale koliformne bakterije, Pseudomonas bacillus), kao i gljivica, čak i jedna pozitivna hemokultura ima dijagnostičku vrijednost. Kada se izoliraju mikroorganizmi koji su prepoznati kao saprofiti kože (koagulaza-negativni stafilokoki, difteri, mikrokoji), dvije su pozitivne krvne kulture potrebne za potvrdu pravog bakterije.

    OCJENA REZULTATA MIKROBIOLOŠKOG STUDIJA URINA

    Stupanj bakteriurije glavni je kriterij diferencijacije zaraznog procesa u mokraćnom sustavu od onečišćenja urina s normalnom mikroflora. Stupanj bakteriurije ne prelazi 3 ug CFU / ml, obično rezultat onečišćenja. Stupanj bakteriurije 3-4 lg CFU / ml smatra se sumnjivim rezultatom i proučavanje treba ponoviti. Stupanj bakteriurije, jednak i veći od 5 J..lg CFU / ml, ukazuje na prisutnost upalnog procesa. Međutim, potrebno je uzeti u obzir osobitosti kliničkih manifestacija bolesti i provedene terapije (ne samo antibakterijski). Na primjer, s lošim prolazom urina, s niskom relativnom gustoćom, kod pH se nalazi u mokraći zdravih ljudi. Monokultura je češća u akutnim upalnim procesima, a kombinira se s visokim stupnjem bakteriurije. Udruženja mikroorganizama češća su kod kroničnih procesa. U konačnoj procjeni rezultata mikrobiološkog pregleda urina potrebno je uzeti u obzir podatke kliničke slike i druge laboratorijske studije.

    Čimbenici koji utječu na rezultat

    Pouzdanost mikrobiološke dijagnostike prvenstveno ovisi o usklađenosti liječnika kliničara s pravilima za uzimanje patoloških materijala za istraživanje i korisnost informacija o stanju pacijenta koji se ispituje, budući da izbor timike mikrobiološkog istraživanja i tumačenje rezultata ovise o tim podacima. Pri uzimanju i transportu biomaterijala za mikrobiološko ispitivanje moraju se pridržavati sljedećih zahtjeva:

    ● uzeti materijal iz izvora infekcije (gdje je uzročnik u maksimalnoj količini) i ako je nemoguće ispuniti ovaj zahtjev, uzeti biološke testove vezane uz izvor infekcije (urin u slučaju patologije bubrega i mjehura, iscjedak iz cervikalnog kanala tijekom endometritisa), ● iscjedak iz rodnice, cervikalni kanal, uretra prije rijetkog vaginalnog pregleda; pobrinite se da pacijent ne koristi lokalno liječenje barem u zadnja 3 dana ● uzmi materijal prije početka antimikrobne terapije i ako je to nemoguće ispuniti, odmah prije sljedeće doze lijeka (kada njegova koncentracija postane minimalna) ● slijedite pravila asepsisa odnosno ne dopuštaju uzimanje kontaminacije uzorka uz istodobnu prolaznu mikrofloru ● koristiti sterilne vunene (dacron) tampone i transportne medije (vaginalni iscjedak, cervikalni kanal, iscjedak rana), spremnici (urina, izmet), štrcaljke (gnoj, eksudat), boce s uzorkovanjem hranjivi medij za krvnu kulturu; Za brzu dijagnostiku virusnih infekcija koriste se tamponske četke od kojih se biomaterijal prenosi na stakleni klizač ili se nalazi u posebnim transportnim medijima ● transport materijala koji je u laboratorij doveden u prikladnom temperaturnom načinu (20-37 ° C) što je prije moguće (ne više od 1-1, 5 h); ako je nemoguće udovoljiti tom zahtjevu, upotrijebite transportne medije i pohranite uzorke u domaćem hladnjaku (osim tekućine i krvi), ● ako se sumnja na anaerobnu infekciju, materijal treba zaštititi što je više moguće od kisika; odmah nakon uzimanja, stavite u anaerobne posude ili na posebne transportne medije;

    ● u slučaju sumnje na gonorejsku infekciju, poželjno je izravno sijanje materijala koji je uzeti sterilnom plastičnom petljom na gustu selektivnu podlogu; Zatim posudu Petri stavlja se u posebnu plastičnu vrećicu s visokim udjelom ugljičnog dioksida i šalje ga u laboratorij.

    Među čimbenicima koji utječu na pouzdanost mikrobiološke dijagnoze mogu se identificirati:

    ● uvjeti za uzimanje i transport biološkog materijala, ● odgovarajući izbor mikrobioloških metoda istraživanja, ● stručne kvalifikacije mikrobiologa,

    ● korisnost informacija o stanju pacijenta koja se ispituje, što je važno u pogledu vrednovanja dobivenih rezultata.

    Potrebno je stalno održavati kontakt s laboratorijem, voditi zajedničke rasprave liječnika i mikrobiologa za brzu uklanjanju zahtjeva i pitanja jedni drugima, periodično analizirati, procijeniti rad kako bi se poboljšala.